本文介紹高效液相色譜法(HPLC)使用YMC-Pack ODS-A(AA12S05-2546WT)色譜柱分離測定桑葉中蘇氨酸、纈氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸等16種游離氨基酸的含量。

來源：新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院

作者：孫蓮、張煊、孟磊、勉強(qiáng)輝、劉海

HPLC檢測桑葉中16種游離氨基酸的含量摘要：

目的：建立柱前衍生法測定桑葉中游離氨基酸的含量。方法：以水超聲提取桑葉中的氨基酸，以異硫氰酸苯酯柱前衍生 ,采用反相高效液相色譜法測定氨基酸的含量 。結(jié)果 : 桑葉中含有蘇氨酸、纈氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、天門冬氨酸、γ-氨基丁酸、丙氨酸、組氨酸、胱氨酸、色氨酸、異亮氨酸等16 種游離氨基酸 ; 其中人體必需氨基酸有 7 種 ,人體半必需氨基酸有 1 種，含量占氨基酸總量的 20 %左右 。結(jié)論 : 本法不需要專門的氨基酸分析儀，操作簡便、靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠 。桑葉中氨基酸的種類齊全、含量豐富 ,具有很高的開發(fā)利用價(jià)值 。

方法: 使用色譜柱:YM C -Pack ODS -A( 250 mm ×4. 6 mm , 5μ m); 流動(dòng)相 A : 醋酸鈉 15 g ,加純凈水 1 700 mL 溶解 , 用乙酸調(diào) pH 6. 5 , 加水至 1 850 m L , 加乙腈 140 m L , 搖勻 , 過 0. 45
μ m 微孔濾膜 ; 流動(dòng)相 B : 乙腈 -水( 4 ∶1), 過 0. 45 μ m 微孔濾膜 , 梯度洗脫( 流動(dòng)相A 與B 比例 : 0 min 為 100 ∶0 , 18. 00 min為 91 ∶9 , 18. 01 min 為 80 ∶20 , 40. 00 min 為 67 ∶33 , 42. 00m in 為 0 ∶100 , 保持 3. 00 min); 流速 : 1. 0 m L ·min - 1 ; 檢測波長 : 254 nm ; 柱溫 : 43 ℃。

結(jié)論：本試驗(yàn)采用異硫氰酸苯酯衍生化法，使桑葉中的氨基酸與異硫氰酸苯酯反應(yīng)，生成單一、穩(wěn)定的苯氨基硫甲酰衍生物，經(jīng) RP -HPLC 分離后, 于 254 nm 波長處紫外檢測 ,具有靈敏度高、衍生化產(chǎn)物穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn) 。

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